Dermatologia veterinária pdf

Resumo da tese de doutorado FMVZ USP: Avaliação do microbioma cutâneo de gatos com dermatofitose pela técnica de sequenciamento de alto rendimento e caracterização de proteínas imunodominantes do Microsporum canis para o sorodiagnóstico da dermatofitose felina. Characterization of fungal and bacterial communities in cats with dermatophytosis using next-generation sequencing and characterization of Microsporum canis immunodominant proteins for serological diagnosis of feline dermatophytosis Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2021.  A dermatofitose é uma doença fúngica comumente vista no atendimento ambulatorial de felinos. A sua importância clínica e epidemiológica reside no fato de ser uma dermatopatia cosmopolita, infecciosa, contagiosa e zoonótica. Atualmente, o cultivo fúngico é a principal ferramenta de diagnóstico utilizada, porém a sua morosidade na emissão do resultado indica a necessidade do desenvolvimento de novas estratégias de diagnóstico. A aplicação de tecnologias de imunodiagnóstico, bem como tecnologias de sequenciamento da microbiota, tem um grande potencial para contribuir na identificação e desenvolvimento de novos alvos diagnósticos. O objetivo desse estudo foi identificar e caracterizar as proteínas imunodominantes do Microsporum canis para aplicabilidade no sorodiagnóstico da dermatofitose felina. Além disso, objetivou-se avaliar a composição e a diversidade das microbiotas fúngica e bacteriana de gatos com dermatofitose, gatos assintomáticos (carreadores de M. canis) e gatos hígidos. Para os ensaios de caracterização das proteínas de M. canis, foram colhidas amostras cutâneas e de sangue de 70 felinos: sintomáticos (n= 20), assintomáticos (n= 20), negativos (n = 20) e negativos heterólogos (n= 10). As amostras cutâneas foram submetidas à cultivos fúngicos para confirmação diagnóstica e subsequente extração de M. canis e as amostras de sangue foram avaliadas por Western blot uni e bidimensional. Para a realização dos ensaios de sequenciamento da microbiota, foram colhidas amostras cutâneas, pelos métodos carpete e escova de dentes, de 45 felinos: sintomáticos (n= 15), assintomáticos (n= 15) e negativos (n= 15). Essas amostras foram submetidas ao sequenciamento de alto rendimento na plataforma Illumina utilizando análise dos genes 16S rRNA e ITS1. Na avaliação bidimensional das proteínas de M. canis, foi observado que elas se encontravam majoritariamente na faixa de pH de 7 a 3. Ainda, o WB revelou um amplo perfil antigênico com proteínas variando de 150 a 20 kDa em peso molecular.  As proteínas de 30 e 42 kDa demonstraram intensa imunorreatividade em felinos sintomáticos e assintomáticos e baixa imunorreatividade nos negativos. O teste de Western blot conseguiu discriminar bem os gatos positivos dos gatos negativos para M. canis demonstrando elevados índices de sensibilidade (92,5%) e especificidade (90%) diagnósticas. Quanto aos resultados da análise de sequenciamento, foi observado que gatos sintomáticos e assintomáticos apresentaram um padrão  semelhante na composição e distribuição da microbiota. Adicionalmente, não foi observado diferença estatística na distribuição relativa do Microsporum entre esses grupos. Os resultados do imunodiagnóstico sugerem que as proteínas de 30 e 42 kDa apresentam elevada acurácia diagnóstica e podem ser utilizadas em teste de WB, bem como são potenciais candidatas à purificação e subsequente utilização em ensaios enzimáticos. Adicionalmente, conclui-se que a atividade proteolítica do M. canis possui maior ação em ph ácido. Em relação aos dados do sequenciamento, conclui-se que o desencadeamento da dermatofitose está mais relacionado a fatores intrínsecos referentes à imunidade do hospedeiro do que com fatores relacionados ao dermatófito ou com a distribuição/composição da microbiota comensal. Adicionalmente, conclui-se que embora o M. canis seja o agente causal e fator determinante para o desencadeamento da dermatofitose, sua ação isolada não é suficiente para desencadear a enfermidade.